池田屋事件（日语：いけだやじけん，又称池田屋骚动、池田屋事变）是1864年7月8日（元治元年旧历六月五日）在京都发生的一宗袭击事件。
文久3年8月18日后，京都的公武合体派扩展势力，尊王攘夷派受到压迫。尊王攘夷派为恢复势力，积极谋划。池田屋是京都三条小桥的一间旅馆，当日京都守护职属下的武装组织新选组突袭池田屋，屋内多位主要来自长州藩的尊王攘夷激进派，重要人物被杀或被捕。
池田屋事件可能令明治维新延迟了一年，也有人认为此事反而刺激尊王攘夷派加快推动维新。
文久3年8月18日后，京都的公武合体派扩展势力，尊王攘夷派受到压迫。尊王攘夷派为恢复势力，制定暗杀中川宫、京都守护职松平容保等的计划。但因三条木屋町的兵器商人桀屋喜右卫门即古高俊太郎被捕而泄露。
八一八后，随着长州兵退京都，尊王攘夷派的势力被彻底赶出了近畿地区，但单个志士的活动仍有增无减。他们利用地下据点，不时发动一些过激行动。元治元年（1864年）夏，又一场大规模行动在暗中策划了。
1864年旧历6月上旬，新选组接到密报：“四条小桥的古道具商人，一个叫俞屋喜右卫门的家伙，行为非常可疑。”俞屋那简陋得只应由下等町民居住的屋子最近却有大量客人出入，新选组在此之前已对这一点感到奇怪，而这次京都所司代送来的情报正好与原来的怀疑相符。
新选组立刻在俞屋家附近各路口布下了密探，不久便证实了所报情况。兵贵神速，6月5日天一亮，俞屋喜右卫门便被一队新选组队士抓到了壬生屯所、前川正治郎邸内的一个泥砌仓库内，由土方亲自审问。
原来，他的真实身份是江州浪士古高俊太郎。并且在其店内搜出了火药点火用品等等，翌日更是发生了新选组的收缴物资被强行夺回的事件，这令土方等人产生了怀疑，在多次拷问之下，确定了长州番士将在京都放火的消息，但是具体地点根本不知道，所以，只能从三条大桥到四条大桥进行搜索。
近藤一面派出使者去找京都守护职会津藩和所司代桑名藩要援兵，一面令队士们三五成群悄悄出动，集合地是八坂神社后面，四条街左手的炻园会所。当暮色悄悄降临八坂神社的石阶时，集结总算顺利完成了。
近藤勇将队伍分成两队，一队由近藤勇率领冲田总司，藤堂平助等10人，另一队则是由土方岁三率领原田左之助等20几人，最后还是由近藤勇率领的一队在池田屋发现了长州藩士。
情况并不那么理想：楼上楼下有浪士二三十人，且多数身手不凡。浪士们从一开始的混乱中镇定下来后，立刻拔刀反击，反而使新选组陷入了困境。本来早有情报说长州奇才桂小五郎也在池田屋，原来的行动计划是全员突击二楼，先杀桂小五郎，“擒贼先擒王”。结果等近藤手持刀杀上二楼回头一看，身边只剩冲田一个人了。近藤在池田屋陷入苦战，但是等土方冲进池田屋，屋内只剩下了二十一名浪士。
长州、土佐、肥后等藩志士，在三条河原町的旅馆池田屋聚会时，遭新撰组的近藤勇等袭击，双方死伤多人。据说桂小五郎是在千钧一发的危机中脱逃的。在这次轰动日本的池田屋事件中，过激浪士共有七人被杀，十一人受伤。
殉难者的名字是：肥后藩宫部鼎藏、长州脱藩吉田稔縻、同吉冈正助、土佐人望月龟弥太、石川润次郎、北添佶磨、播州高又次郎。
令人难以相信的是：长州藩尊王派巨头桂小五郎因为迟到，结果半路得到消息便立刻返回了藩邸，奇迹般地脱此大难。不久吉田稔縻送来十万火急的求援信，桂也闭门不应。
“出于维新之前途着想，彼次行动之时实在不可应援，并非畏惧......”数年后，桂在书中写道。
随后，会津、桑名两藩大队人马赶到，如临大敌地封锁了池田屋附近的三条地区和长州藩邸。从这一夜起，新选组“壬生刽子手”、“壬生狼”的大名迅速自京都、大坂传遍了整个日本。
看看浪士们的计划吧：一、劫持天皇往长州。二、暗杀中川宫亲王和京都守护职松平容保。三、在京都四面放火。京都居民自保元平治、应仁的战火后，非常惧怕火灾。如果没有新选组的强袭池田屋，京都会怎样呢？
翌月的禁门之变给了答案。在七月十九日的战斗后，京都由于长州兵的进犯而化为火海。大火三天后才被扑灭。
上京的八百二十九町中一百七十六町被烧毁，二万四千五百七十四间房中五千四百三十五间化为灰烬。下京的灾情更为惨重：二万四千八百四十间房中有二万三千九十二间被毁，维新后花了很长时间才得以修复。三都之首的京都昔日繁华的街道上尸体狼藉。
新选组因此事而声名大噪，而尊王攘夷派则损失惨重，重要人物吉田稔磨、北添佶摩、宫部鼎藏、大高又次郎、石川润次郎、杉山松、松田重助死亡（他们通常被称为“殉难七士”）。桂小五郎（后来的木户孝允）幸免于难。
长州藩在此事后举兵上京，引起禁门之变。池田屋事件可能令明治维新延迟了一年，也有人认为此事反而刺激尊王攘夷派加快推动维新。
池田屋事件是日本近代史上的重要事件，它“使明治维新推迟了一年。”这次打击使长州的尊攘派暴跳如雷，真木和泉、久坂玄瑞、来岛又兵卫等激进派立刻压倒了高杉晋作等开国派，决定兵进京都。高杉等人在冷静地分析之后，把日本的维新导向了开国、倒幕的正确道路。
福田定一（司马辽太郎）的看法是，由于池田屋事件的冲击，使萨长帮联合各藩兵进京都，从而提前了明治维新。